Клеточные технологии

Мы проводим первичный и вторичный фармакологический скрининг, оценку специфической активности и токсичности соединений на ранних этапах разработки.

Определение полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC50) с построением кривых «доза-эффект». Используются спектрофотометрические (МТТ, XTT), люминесцентные и флуоресцентные методы детекции.

Мы осуществляем переход от стандартных монослойных культур к продвинутым 3D-моделям, которые более точно имитируют тканевое микроокружение и физиологию тканей:

• Сфероиды*: оценка противоопухолевой активности и проникновения веществ в плотные структуры (скрининг цитостатиков, изучение механизмов резистентности) .
• Органоиды: работа с дифференцированными культурами, воспроизводимыми архитектуру ткани (нейросферы*, органоиды кишечника и др.). Моделирование заболеваний и тестирование препаратов на пациент-специфичных органоидных линиях.

Оценка генотоксического потенциала в соответствии со стандартами OECD. Автоматизированный подсчет микроядер в клетках млекопитающих для выявления кластогенных и анеугенных эффектов.

Уникальная компетенция НИИ — анализ клеточного метаболизма в реальном времени на анализаторе Agilent Seahorse HS Mini.

• Измерение скорости потребления кислорода (OCR) и скорости закисления среды (ECAR).
• Оценка параметров митохондриального дыхания (базальное, АТФ-связанное, максимальное, резервная мощность).
• Анализ гликолитической функции.

Выявление точковых мутаций и прямых повреждений ДНК с применением классических валидированных методов: тест Эймса в модификации для клеток млекопитающих, анализ HPRT-мутаций. Подход соответствует стандартам OECD и позволяет оценить мутагенный потенциал соединений на ранних этапах разработки. Исследование проводится в соответствии с международными стандартами OECD (Тест № 476 и № 490) и рекомендациями ICH для доклинической оценки безопасности. Метод позволяет детектировать точковые мутации в локусах-маркерах (HPRT, TK, трансгенные гены) в клетках млекопитающих in vitro. Полученные данные являются обязательной частью регуляторного досье при регистрации фармацевтических субстанций, химических соединений и продуктов химического синтеза, обеспечивая оценку мутагенного потенциала на ранних этапах разработки.

Анализ структурных повреждений хромосом (разрывы, транслокации) с использованием дифференциального окрашивания и микроскопии. Тест на хромосомные аберрации является обязательным этапом доклинических исследований согласно рекомендациям OECD (Тест № 473) и ICH. Он позволяет количественно оценить частоту клеток с аберрациями и дифференцировать типы повреждений (хроматидные и хромосомные разрывы, обмены). Полученные данные используются для расчета мутагенного риска и обоснования безопасности фармацевтических субстанций и химических соединений.

НИИ фармакологии живых систем располагает коллекцией культур клеток позвоночных для проведения доклинических исследований:

• Первичные клеточные линии:
  1. Мезенхимные стволовые клетки: человек (Homo sapiens), мышь домовая (Mus musculus), крыса серая (Rattus norvegicus), хомячок сирийский (Mesocricetus auratus), курица домашняя (Gallus gallus), кролик дикий, или европейский кролик (Oryctolagus cuniculus).
  2. Мезенхимные стволовые клетки от генетически модифицированных линий лабораторных мышей SNCAflox, Tau, Bla/j, Fus-S, Fus-L, Hprt, ApoE, Hsd, App/Psen1.
• Паспортизированные клеточные линии: NCTC клон 929, мышь C3H/An, подкожная соединительная ткань (ИНЦ РАН), СНО-К1 китайский хомячок, яичник, клон линии СНО (ИНЦ РАН), MSC-PL2 мезенхимные стволовые клетки плаценты человека (ИНЦ РАН), Неla-v человек, карцинома шейки матки (ООО “БиолоТ”), A 549 человек, карцинома легкого (ООО “БиолоТ”).
• Половые клетки: Сперматозоиды (КРС).