Молекулярная биология
Мы обеспечиваем полное и высокоточное сопровождение ваших исследовательских и прикладных задач – от выделения нуклеиновых кислот до полностью валидированных протоколов ПЦР и расширенных анализов белков. Все работы выполняются сертифицированными специалистами с использованием современного высокоточного оборудования продукции BioRad (CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System, iMark™ Microplate Absorbance Reader), Roche (LightCycler® 96 Instrument), Invitrogen, с прозрачной системой предоставления отчётности о качестве выполняемых работ.
Выделение нуклеиновых кислот из широкого спектра биологических материалов
- Выделение ДНК из клеточных культур, тканей животных и растений, крови, почвы, семян и других образцов.
- Выделение РНК из аналогичных материалов (включая сложные образцы с высокой РНКазной активностью).
Контроль качества выделенных нуклеиновых кислот (входит в стоимость каждого заказа):
- Спектрофотометрическая чистота (A260/A280 ≈ 1,8-2,2; A260/A230 ≥ 2,0)
- Измерение концентрации (нг/мкл или мкг/мкл)
- Проверка целостности (RIN для РНК 7-10; высокомолекулярная ДНК подтверждена электрофорезом)
- Объем: до 100 мкл
- Хранение: в условиях, не содержащих нуклеаз, при температуре -80°C (РНК) или -20°C (ДНК).
Разработка ПЦР-протокола
Мы создаем готовые к использованию, полностью оптимизированные протоколы ПЦР, адаптированные к вашей конкретной задаче.
- Дизайн праймеров (включая вырожденные праймеры) с использованием специализированного программного обеспечения с проверкой специфичности in silico по базам данных.
- Дизайн зондов для TaqMan, молекулярных маяков или гибридизационных зондов (qPCR, RT-qPCR).
- Выбор и оптимизация условий проведения реакции (температура отжига, концентрация Mg2⁺, тип полимеразы, условия горячего запуска).
- Разработка мультиплексной ПЦР (до 6-8 мишеней в одной реакции).
- Адаптация протокола для различного оборудования и матриц образцов.
Вы получаете полный утвержденный протокол с последовательностями праймеров и зондов, оптимизированными параметрами циклирования и рекомендуемым составом реакционной смеси.
Почему выбирают НИИ Фармакологии живых систем?
- Сравнительное изучение фармакокинетики и биоэквивалентности (для воспроизведенных препаратов) позволяет подтвердить терапевтическую взаимозаменяемость с оригиналом.
Клиническая база: Проводится в ОГБУЗ «БОКБ Святителя Иоасафа». Включает отбор добровольцев, медицинский уход и прецизионный забор проб.
Аналитическая часть: Выполняется в лаборатории фармакокинетики НИИ Фармакологии живых систем. Используются валидированные методики ВЭЖХ-МС/МС для определения концентраций в плазме и статистического анализа. - Открытое сравнительное проспективное рандомизированное исследование биологически активных добавок.
- Открытое сравнительное проспективное рандомизированное исследование лекарственных препаратов.
Валидация ПЦР-анализа
Перед рутинным использованием каждый разработанный или предоставленный заказчиком протокол проходит полную аналитическую проверку в соответствии с международными стандартами (принципы MIQE).
Определение эффективности амплификации (для праймеров и зондов): метод стандартной кривой, эффективность 90-110%, R2 ≥ 0,98.
Анализ специфичности продуктов реакции: отсутствие неспецифических ампликонов и праймер-димеров (гель-электрофорез + кривая плавления или проверка специфичности зонда).
Анализ кривой плавления с высоким разрешением (HRM) для дифференциации генотипов и сканирования мутаций.
Оптимизация методики ПЦР и окончательная проверка предела обнаружения (LOD), предела количественной оценки (LOQ), линейности и воспроизводимости (CV внутри- и промежуточных анализов < 5%).
По итогам проведённых анализов заказчику предоставляется подробный отчет с рекомендациями к использованию и внедрению протокола в рутинный анализ.
Мы выполняем все виды ПЦР и белковых анализов “под ключ”, используя уже утвержденные протоколы или разработанные нами протоколы.
ПЦР-анализ
- Генотипирование и SNP-анализ (включая HRM)
- Конечная ПЦР для выявления специфических последовательностей ДНК/РНК, клонирования и качественного анализа.
- Анализ экспрессии генов
- Количественная ОТ-ПЦР, относительная и абсолютная количественная оценка (метод ΔΔCt или стандартная кривая)
- Анализ количества копий трансгенной кассеты
- Точное определение числа копий на основе кПЦР в генетически модифицированных организмах (растениях, животных, клеточных линиях)
- Дополнительные области применения ПЦР
- Выявление и количественная оценка патогенов (вирусов, бактерий, грибков)
- Мультиплексная ПЦР
ИФА
Количественное определение белков, цитокинов, гормонов, антител и антигенов с использованием многослойного, конкурентного и прямого методов. Высокая чувствительность и широкий диапазон линейного ответа.
SDS-page
Разделение белков по молекулярной массе с высоким разрешением. Окрашивание Кумасси, подготовка к последующему вестерн-блоттингу.
Western Blot
Специфическая иммунодетекция белков-мишеней: перенос, блокирование, инкубация антител, флуоресцентная детекция, количественная оценка.
Обучение
Готовы проводить практические занятия и мастер-классы для Вашего персонала:
- Методы выделения нуклеиновых кислот
- Разработка праймеров и настройка кПЦР
- Методы вестерн-блоттинга и иммуноферментного анализа
- Анализ данных и контроль качества
- Индивидуальный или групповой формат